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分光光度法的作用及定量測定方法
日期：2025-01-08 18:47
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摘要：
分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析的方法。它具有靈敏度高、操作簡便、快速等優(yōu)點，是生物化學實驗中*常用的實驗方法。許多物質的測定都采用分光光度法。在分光光度計中，將不同波長的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時，便可得到與不同波長相對應的吸收強度。
利用分光光度法對物質進行定量測定，主要有以下幾種方法：
利用分光光度法對物質進行定量測定，主要有以下幾種方法：
1、標準管法
將待測溶液與已知濃度的標準溶液在相同條件下分別測定A值，然后按下式求得待測溶液中物質的含量。
CT=（AT/AS）*CS
2、標準曲線法
先配制一系列濃度由小到大的標準溶液，分別測定出它們的A值，以A值為橫坐標，濃度為縱坐標，作標準曲線（A~c工作曲線），可以求出標準曲線的回歸方程。在測定待測溶液時，操作條件應與制作標準曲線時相同，以待測液的A值從標準曲線上查出（得到）該樣品的相應濃度。
3、吸光系數(shù)法
當某物質溶液的濃度為1mol/L，厚度為1cm時，溶液對某波長的吸光度稱為該物質的摩爾吸光系數(shù)，以ε表示。ε值可通過實驗測得，也可由手冊中查出。例如亞鐵氮二雜菲配合物的ε值 等于11000 L/cm·mol
已知某物質ε值，只要測出其A值再根據(jù)下式便可求得樣品的濃度：c=A/ε。