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微量雙鏈 DNA 定量試劑盒實驗步驟
日期：2025-01-05 15:11
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摘要：
微量雙鏈 DNA 定量試劑盒實驗步驟:
1、實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)。
2、取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻。
3、65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次。
4、加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)。
5、取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)。
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微量雙鏈 DNA 定量試劑盒實驗步驟:
1、實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)。
2、取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻。
3、65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次。
4、加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)。
5、取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)。
6、加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)。
7、10,000rpm,4℃離心20min。
8、棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀。
9、酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)。
10、加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上。
11、12,000rpm,4℃離心20 min。
12、棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥。
13、加200ul的DEPC處理水溶解。
14、用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量。
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))