基本原理 ：

將質(zhì)粒 DNA 導(dǎo)入xi菌的過程稱為轉(zhuǎn)化（ Transformation ）。此感受態(tài)xi菌細(xì)胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀（感受態(tài)xi菌的制備，見前）。質(zhì)粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復(fù)合物黏附于xi菌表面，經(jīng) 42℃ 短時(shí)間熱沖擊處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收 DNA 復(fù)合物。在豐富培養(yǎng)基上生長(zhǎng)數(shù)小時(shí)后，球狀細(xì)胞復(fù)原并分裂增殖。被轉(zhuǎn)化的xi菌中，外源基因得到表達(dá)。在選擇性培養(yǎng)平板上，可選出所需的轉(zhuǎn)化子（即含有質(zhì)粒 DNA 的xi菌）。鈣處理的感受態(tài)細(xì)胞，一般每微克 DNA 能獲得 10 5 ～ 10 6 個(gè)轉(zhuǎn)化子。除化學(xué)方法轉(zhuǎn)化xi菌外，還有電穿孔法（ Electroporation ），其轉(zhuǎn)化率可高達(dá) 10 9 ～ 10 10 個(gè)轉(zhuǎn)化子 /μg 質(zhì)粒 DNA 。

器材 ：

1 ．培養(yǎng)皿 2 ．恒溫培養(yǎng)箱

試劑 ：

1 ． LB 培養(yǎng)基

2 ．選擇性 LB 瓊脂培養(yǎng)平板（含氨芐青霉素，終濃度為 50μg/ml ）

3 ．氨芐青霉素 100 mg/ml

4 ．宿主xi菌：經(jīng) 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態(tài)xi菌 DH5α

 操作步驟 ：

 取 50 μL 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，加入適量質(zhì)粒（體積不得超過 4 μL ）冰浴 30 min 后， 42℃ 熱激 90 s ，馬上放回冰上，冰浴 2 min ；加 400 μL LB 培養(yǎng)基，于 37℃ 搖床慢搖振蕩培養(yǎng) 45-60 min ；取 50-100 μL 涂在含有氨芐青霉素（ 100 μg/mL ）的 LB 固體培養(yǎng)基上， 37℃ 倒置培養(yǎng)過夜。