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生化試劑，標(biāo)準(zhǔn)品,對照品，PCR試劑盒，?核酸檢測試劑盒，熒光定量檢測試劑盒，生化試劑盒?，比色法試劑盒，酶活性檢測試劑盒，ELISA試劑盒，酶聯(lián)免yi檢測試劑盒，試劑盒，ELISA試劑盒，抗體，重組蛋白，分光光度法檢測試劑盒，細(xì)胞株，原代細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基，標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
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熒光定量PCR對標(biāo)準(zhǔn)品要求
日期：2025-01-08 15:11
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摘要：熒光定量PCR對標(biāo)準(zhǔn)品要求
熒光定量PCR檢測的是起點(diǎn)熒光值，定量分析的是未經(jīng)PCR放大之前的起始模板量。
這就涉及到熒光定量PCR的第2個關(guān)鍵點(diǎn)——定量方式的選擇：相對定量和絕dui定量。
絕dui定量可測定目的基因在樣本中的具體拷貝數(shù)，相對定量測定的是目的基因在兩個或多個樣本中的相對表達(dá)水平，定量方式的選擇取決于實(shí)驗?zāi)康摹?
絕dui定量必須使用已知濃度/拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，絕dui定量對標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確度要求較高，相對來說對標(biāo)準(zhǔn)品的要求也比較高。標(biāo)準(zhǔn)品的要求：
（1）標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本用相同的引物進(jìn)行擴(kuò)增，確保引物在兩者中擴(kuò)增效率相同。
（2）標(biāo)準(zhǔn)品來源可以是基因組DNA，質(zhì)粒DNA，純化的PCR產(chǎn)物，Total RNA（cDNA），體外轉(zhuǎn)錄的 RNA等，其中基因組DNA和Total RNA（cDNA）不能直接用作標(biāo)準(zhǔn)品。
（3）標(biāo)準(zhǔn)品必須經(jīng)過準(zhǔn)確定量，其拷貝數(shù)必須已知。
（4）標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本要在同一次實(shí)驗以及相同的條件下完成，擴(kuò)增效率盡量接近。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:
將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋5~6個濃度梯度，稀釋倍數(shù)可以選擇5倍（cDNA）或10倍（質(zhì)粒DNA、體外轉(zhuǎn)錄RNA）。