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WB蛋白提取過程
日期：2025-01-08 15:10
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摘要：
WB是一種把電泳分離的組分從凝膠轉(zhuǎn)移到一種固相支持物(NC膜或PVDF膜)，并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測。WB采用抗體作為探針，抗體可以與附著在固相支持物的靶蛋白的抗原表位發(fā)生抗原-抗體免yi反應(yīng)。這種技術(shù)的作用是對細(xì)胞或組織提取的蛋白混合物(即總蛋白混合物)中的某一特異蛋白進(jìn)行鑒別和半定量分析，旨在鑒別特異性蛋白的類型(如亞型、聚體、剪切體等)和蛋白表達(dá)量的變化。下面了解蛋白提取過程：
常規(guī)的樣品無外乎3種，分別是培養(yǎng)的細(xì)胞、動物組織(磨碎或剪碎至肉眼觀察無顆粒)、術(shù)中切割的腫瘤細(xì)胞...
WB是一種把電泳分離的組分從凝膠轉(zhuǎn)移到一種固相支持物(NC膜或PVDF膜)，并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測。WB采用抗體作為探針，抗體可以與附著在固相支持物的靶蛋白的抗原表位發(fā)生抗原-抗體免yi反應(yīng)。這種技術(shù)的作用是對細(xì)胞或組織提取的蛋白混合物(即總蛋白混合物)中的某一特異蛋白進(jìn)行鑒別和半定量分析，旨在鑒別特異性蛋白的類型(如亞型、聚體、剪切體等)和蛋白表達(dá)量的變化。下面了解蛋白提取過程：
常規(guī)的樣品無外乎3種，分別是培養(yǎng)的細(xì)胞、動物組織(磨碎或剪碎至肉眼觀察無顆粒)、術(shù)中切割的腫瘤細(xì)胞。這些樣品需要在裂解液或強(qiáng)去污劑中充分裂解，細(xì)胞中的物質(zhì)(總蛋白、基因、其它內(nèi)容物等)才能釋放出來，隨后離心取上清液(即總蛋白混合物)。常用的裂解成分大多包含Triton X-100、NP-40、十二烷基硫酸鈉等，這些成分具有較強(qiáng)的表面活性作用和還原作用，可將細(xì)胞膜或核膜裂解，釋放其中的物質(zhì)。同時，裂解液中還包含其它成分，如Tris-Hcl作為緩沖劑，可防止蛋白在提取過程中變性；以及Nacl，可防止提取的蛋白由于非特異性的聚集而形成聚體等。不同公司**的裂解液成分大同小異，多是以上成分按不同比例組成，可分為弱、中、強(qiáng)三種不同裂解能力的裂解液。
重要的是我們要清楚自己研究的蛋白到底在細(xì)胞哪里表達(dá)，是細(xì)胞膜、胞漿還是細(xì)胞核。這決定我們該使用哪種強(qiáng)度的裂解液。如果裂解不充分，我們抽提的總蛋白中可能已經(jīng)不包括目標(biāo)蛋白或目標(biāo)蛋白隨著沉淀物被丟棄，那么整個WB實驗從一開始就悄無聲息地失敗了。