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抗血清的純化與保存
日期：2025-01-07 10:56
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摘要：抗血清的純化與保存
抗血清的純化與保存：
除抗體外血清中含有多種其他蛋白成分。為了避免這些蛋白質干擾抗體（免yi球蛋白）標記反應和抗原抗體反應，抗血清可經(jīng)過純化以獲得單一的機體（常為IgG）組分。
常用的純化IgG的方法為飽和硫酸胺鹽析和層析法。蛋白質在不同的鹽濃度的溶液中，其溶解度不一樣，鹽離子干擾蛋白質和水分子間氫鍵形成，因為水—鹽結合比水—蛋白質結合更穩(wěn)定，蛋白質即可從溶液中沉淀出來。蛋白質分子越大，沉淀時所需鹽離子濃度越低。
免yi 球蛋白（Mr 1.5×105）比血清中主要蛋白質白蛋白（M r 6.7×104）的分子大得多，抗體在30%—50%飽和度的硫酸鹽中析出，而白蛋白需在70%—80%飽和度才析出，因此常用33%飽和度的硫酸胺純化血清中的IgG。鹽析時為了減少抗體變性，需在4℃進行，同時用pH8.0緩沖液稀釋抗血清，以減少蛋白濃度過高而發(fā)生共沉淀。銨鹽的溶解度不隨溫度變化而明顯改變，0℃和25℃僅差3%，而鈉鹽則相差5倍，因此常在低溫沉淀時用銨鹽，室溫沉淀用鈉鹽。銨鹽對抗體的標記反應（如FITC和biotin標記時）有一定的干擾作用。