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RNA提取注意事項(xiàng)
日期：2025-01-07 11:10
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摘要：RNA提取注意事項(xiàng)
RNA提取注意事項(xiàng)
1、組織樣本要盡可能的新鮮，避免反復(fù)凍融。
2、提取時(shí)組織要充分研磨，組織量不宜過(guò)少，更不宜過(guò)多。
3、加入裂解液后應(yīng)給予充分的孵育時(shí)間，使樣本充分裂解。
4、在用Trizol法提取時(shí)，分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸，不能多吸”，千萬(wàn)不能提取到中間層，否則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的基因組DNA污染。
5、洗滌時(shí)洗滌液應(yīng)充分浸潤(rùn)到管壁的四周，確保洗滌徹底。
6、柱式提取法，洗滌完后除了對(duì)柱子進(jìn)行空離后，還應(yīng)當(dāng)將吸附柱置于超凈臺(tái)內(nèi)吹風(fēng)5~10 min，使有機(jī)溶劑充分揮發(fā)干。
7、柱式法*后洗脫時(shí)候，當(dāng)加入DEPC水后還應(yīng)孵育3~5 min，或者提前將DEPC水加熱至60℃，可提高洗脫得率。傳統(tǒng)的Trizol裂解異丙醇沉淀法*后RNA是用DEPC水溶解沉淀，則應(yīng)當(dāng)給予適當(dāng)溶解時(shí)間，并用槍頭不斷吹吸離心管底部。