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ELISA競爭法實(shí)驗(yàn)步驟
日期：2025-01-07 10:53
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摘要：
競爭法首先將特異性抗體吸附于固相載體表面，我們把抗原和抗體吸附到固相載體表面的這個過程，稱為包被（Coated），也可叫做致敏。經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液，而另一組只加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為我們所要測定的未知抗原的量。
這種方法所測定的抗原只要有一個結(jié)合部位即可，因此，對小分子抗原如激su和藥wu之類的測定常用此法。該法的優(yōu)點(diǎn)是快，因?yàn)橹挥幸粋€保溫洗滌過程。但需用較多量的酶標(biāo)記抗原為其缺點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、包被...
競爭法首先將特異性抗體吸附于固相載體表面，我們把抗原和抗體吸附到固相載體表面的這個過程，稱為包被（Coated），也可叫做致敏。經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液，而另一組只加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為我們所要測定的未知抗原的量。
這種方法所測定的抗原只要有一個結(jié)合部位即可，因此，對小分子抗原如激su和藥wu之類的測定常用此法。該法的優(yōu)點(diǎn)是快，因?yàn)橹挥幸粋€保溫洗滌過程。但需用較多量的酶標(biāo)記抗原為其缺點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至*適濃度（1～10 ug /ml），每凹孔加0.3 ml，4℃過夜，或37℃水浴3小時，貯存冰箱。
二、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。
三、分2組，a組加酶標(biāo)記抗原和被檢抗原混合液0.2 ml，b組只加酶標(biāo)記抗原液0.2 ml，37℃作用1～2小時。（混合液可作成不同稀釋度）
四、洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。
五、加入0.2 ml底物溶液于每個凹孔(OPD或OT)，室溫作用30分鐘（另作一空白對照，0.4 ml底物加0.1 ml終止劑）。
六、加終止劑：每凹孔加2 M H2SO4或2 M檸檬酸0.05 ml。
七、用酶標(biāo)比色計測定a、b兩組OD值，并求出a、b、OD值的差數(shù)。